设计要点:
目前,siRNA设计大都根据Tuschl的实验,要点如下:
1.目标基因开放阅读框起始密码(“ATG”)下游75至100碱基位置开始,寻找“AA”二连序列后的19个碱基序列。(用非“AA”的“XY”序列后的19个碱基序列同样可以得到很好效果的siRNA)。
设计siRNA时不要针对5'和3'端的非编码区。
2.分析获得的序列,选择GC比在40-55%之间的靶基因序列作为潜在优选。
3.将潜在的序列和相应的基因组数据库(人,或者小鼠,大鼠等等)进行比较,排除和其他编码序列/EST同源的序列。例如使用BLAST等。
4. 如果您选择shRNA,有报道显示9个寡核苷酸的环是最有效的。
近来有报道显示,29nt的shRNA较23nt的效果更好。
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