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产品介绍
 
电转保护剂
技术简介:
    核酸不能自动进入细胞,需要协助才能穿过细胞壁的物理屏障进入能够进行表达和/或复制的胞内位点。电流能够可逆地击穿细胞膜形成瞬时的水通路或膜上小孔促使DNA分子进入胞内,这种方法就是电穿孔。电穿孔的主要应用优势是适用的细胞范围广,不论真核细胞还是原核细胞都能被有效转染。当遇到某些脂质体转染效率很低和几乎无法转入时建议用电穿孔法转染。
    一般情况下,高电场强度会杀死50%-70%的细胞。这种致命的后果根据细胞系的不同而异,与加热或电解无关,也与当时施加的能量与密度无关。相反,细胞死亡与电场强度与整体作用时间相关。美国Amerieast公司针对细胞死亡开发出了一种电转保护剂,该保护剂能够大大降低电转染时细胞的死亡率,同时提高电穿孔转染效率。
    etrans kit是为转染困难的原代神经细胞开发的转染试剂,其关键技术是在现有电转染试剂的基础上,加入了细胞膜保护成分。美国Amerieast公司拥有该专利。该保护剂能够迅速修复因电激打开的细胞膜。减少因细胞膜开放导致培养液成分进入细胞对细胞造成的伤害。当然, etrans kit能够用于任何细胞(困难转染和容易转染细胞)。
 
产品特点:
1. etrans kit基本能够做到转染后的细胞保持原细胞的特性。电转染48小时后神经细胞就能够长出很长的足突。而使用其它同类产品,神经细胞大都丧失了足突生长能力(只能生长出极少且短的足突)。
   

 
2. 提高了转染效率
由于细胞膜保护剂的使用,细胞耐受提高,可以提高增强电转条件,从而提高转染效率。与其它电转染试剂相比,etrans kit或者大大提高转染效率,或者大大提高活细胞数量,或者转染效率和活细胞比率均相对提高。
 
3. 困难转染细胞在多数情况下, 使用现有转染试剂无法工作,比如原代神经细胞,当转染效率达到1-3%时,细胞存活率通常低于5%,又如肿瘤细胞系A431使用脂质体转染试剂转染效率不足5%,难以继续进行下一步的工作。此时,etrans试剂的优势体现出来,使用etrans电转染可以使肿瘤细胞系A431转染效率达到50%。虽然对原代神经细胞转染效率只提高到30%,但细胞存活率高,而且细胞活性影响小小,可以进行下一步的工作。
 
不同电转染试剂盒相同转染效率情况下细胞成活百分率
             

 
不同电转染试剂盒相同细胞生存情况下转染效率
 

 
困难转染细胞不同电转染试剂盒和脂质体转染试剂盒综合使用情况比较
 

困难转染细胞脂质体转染效率与Etrans kit转染效率比较
 

细胞

脂质体转染效率

Etrans kit转染效率

原代神经细胞

3

30

原代狗间质干细胞

0

70

原代小鼠质干细胞

0

45

A431

4

50

THP1

2

70

LA4

5

40

A875

25

75

HepG2

30

65

 
 

 
适用范围:
    适用所有细胞的电转染、特别适用于现有转染试剂转染效率低下时的细胞转染。
    晶赛公司提供etrans kit转染预实验服务,确定您的实验细胞转染效率后,您再决定是否购买etrans kit。
 
操作步骤:
1.  收集细胞:用胰酶消化细胞,将细胞培养液吸入到15ml离心管中,分为6管,900rpm, 5min,弃其上清。
2.  用不含血清的培养液洗一次,弃上清。
3.  取5ug质粒加入到100ul电转缓冲液中,充分混匀。
4.  用100ul混有质粒的电转缓冲液充分溶解细胞,转入2mm电转导入杯中。
5.  将电转导入杯放入样品槽中,释放电脉冲。
6.  立即取出电击杯,分别用一次性吸管将混和液转移至加有DMEM培养基的一次性细胞培养瓶中,放入细胞培养箱中培养。
 
客户须知:
    RNAi实验成败的关键在于转染效率。大多数细胞系用脂质体转染的转染效率在40%以下,直接进行RNAi实验会出现似是而非的实验结果。使用etrans kit提高转染效率和加强细胞保护性,是提高了RNAi实验成功的方法之一。当然,etrans kit提高转染效率的能力是有限的。
 
产品价格:
    参见产品目录
 
 
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